Экстракция LSA


Экстракция ЛСА

 

ЭКСТРАКЦИЯ И ИДЕНТИФИКАЦИЯ КЛАВИНОВЫХ АДКАЛОИДОВ И АЛКАЛОИДОВ ЛИЗЕРГИНОВОЙ КИСЛОТЫ В СЕМЕНАХ РАСТЕНИЯ "УТРЕННЯЯ СЛАВА" (Ipomoea violacea)



WELDON L. WITTERS

Департамент Зоологии и Микробиологии , Университет Огайо 
Цитируется по "Ohio J. Sci." 75(4), стр. 198, 1975г. Перевод: siouxsie at entheogen.ru (оригинал: доступен здесь)

ВВЕДЕНИЕ:

Семена трех разновидностей ипомеи, выращенной в штате Огайо были протестированы на наличие клавиновых алкалоидов и алкалоидов лизергиновой кислоты. Сравнивались три различных способа экстракции эрголиновых алкалоидов , и было показано значительное приемущество метода со смесью нашатырного спирта, метанола и хлороформа. Сравнивались четыре хроматографические системы на предмет нахождения лучшей для идентификации алкалоидов, и было показано, что TLC c со смесью этилацетата, этанола и диметилформамида (диметлиламида муравьиной кислоты) дает наилучшее разрешение для эрголиновых алкалоидов. Ipomoea violacea L. var Pearly Gates в тесте показала значительно большее содержание алкалоидов и большее количество уникальных эрголиновых алкалоидов.

Уже сравнительно давно ученым было известно о целом ряде галлюциногенных адкалоидов в таких, не имеющих ничего общего между смобой представителях флоры , как кактусы, грибы и вьюнки. Существуют свидетельства об использовании этих растений некоторыми группами индейцев для церемониальных целей (MacDougall, 1960; Schultes, 1941), хотя нет таких данных об индейцах проживающих в штате Огайо. MacDougall считал , что некоторые индейские племена использовали вьюнковые в религиозных церемониях и как своего рода наркотик и анальгетик. В начале 1570-х, личный врач-терапевт короля испании, Эрнандез (Hernandez), писал что Ацтеки использовали семена вьюнковых, которые они называли Ололиуки (Ololiuqui) для связи со своими богами (Hoffman, 1968).

В 1930-х годах Швейцарская фармацевтическая компания Сандоз (Sandoz) выделела несколько фармакологически активных веществ из гриба-паразита - спорыньи (Claviceps purpurea). Эти вещества оказались производными лизергиновой кислоты и клавиновыми алкалоидами. Эти соединения иногда еще называют эрголиновыми соединениями (Der Marderosian, 1965). В 1938, Альберт Хоффман, работающий в то время в Сандоз синтезировал LSD из эрголиновых алкалоидов , а в 1960-м он обнаружил наличие производных лизергиновой кислоты и клавиновых в семенах растения Ipomoea violacea Sp. (Hoffman , 1968)

Несколько исследований с тех пор подтвердили наличие эрголиновых алкалоидов в различных видах Ipomoea (Genest, 1966; Niwaguchi and Inoue, 1969; Taber et al., 1963). В литературе имеется много данных о количественном и качественном анализе вьюнковых на эрголиновые соединения. Все эти данные в значительной степени зависили от используемой техники экстракции и идентификации. Наши лабораторные исследования показали что содержание алкалоидов варьирует от урожая к урожаю , и в то же время техника экстракции и используемый метод анализа имеют первостепенное значение.

МЕТОДИКА:

Семена были собраны с трех различных подвидов ипомеи: Ipomoea violacea L var. Heavenly Blue , Ipomoea violacea L var. Pearly Gates и Ipomoea violacea L var. Blue Star. (по классификации предложенной Der Marterosian 1967). астения были выращены из семян купленных у George W. Park Seed Co., Greenwood, North Carolina.

Сравнивались три метода экстракции эрголиновых алкалоидов, в каждом из готорых экстракция производилась из 5 граммов семян (для каждого вида - отдельно). Семена были помолоты с использованием чистого кварцевого песка. Содержание эрголиновых алкалоидов было проанализировано цветометрическими методами , разработанными (Genest 1966, Vinning and Taber 1959).

Были использованы следующие методы экстракции:

1. Помолотые семена промывались 50 мл. смеси 10% бикарбоната натрия (соды) и этилацетата (смесь готовилась из расчета 1:1). растворитель затем отделялся от жмыха и высушивался. Получившийся после высушивания растворителя осадок осадок обрабатывался 50 мл. смеси (1:1) диэтилового эфира и 1% винной кислоты. Алкалоиды присутствовали в нижнем слое (Tabert et al., 1963).

2. Помолотые семена были залиты 10% нашатырным спиртом в диэтиловом эфире. астворитель затем фильтровался, упаривался и осадок обрабатывался смесью диэтилового эфира и винной кислоты , так же как и в методе (1).

3. Помолотые семена обрабатывались смесью (10:90:900) нашатырного спирта, метанола и хлороформа. После постоянного перетряхивания смеси в течении 5 минут было добавлено 50 мл. хлороформа и 2 мл. воды. Смесь была отфлильтрована через стекловолокно (Alexander and Banes , 1961).

Полученный раствор в каждом из описанных выше методов обрабатывался хлороформом, после нейтрализации раствора избытком содой. Хлороформ затем отгонялся под вакуумом и осадок растворяли в этаноле.

Изоляция и идентификация эрголиновых алкалоидов выполнялась четырмя различными хроматографическими методами. (описание методов TLC пропущено и может быть найдено в оригинале статьи здесь, прим. перев.)

ЕЗУЛЬТАТЫ:

Из трех проанализированных видов, Ipomoea violacea L var. Pearly Gates показала значительно более высокое содержание алкалоидов во всех трех методах экстракции описанных выше (Табл. 1). азновидность Pearly Gates дала в конечном счете 0,060% в среднем в пересчете на вес свежих семян , в то время как для Heavenly Blue (известная в оссии как "Небесно Голубая" прим. перев.) и Blue Star это значение было 0,034 и 0,027% соответственно. Способ экстракции с использованием нашатырного спирта, метанола и хлороформа, разработанный Alexander и Banes в (1961) дал наилучший выход в пересчете на вес свежих семян при экстрагировании из трех вышеописанных видов.

Содержание алкалоидов в семенах Ipomoea *
% \ масса семян, в трех различных методах экстракции **
азновидность123Среднее
Heavenly Blue0.0280.0360.0380.034
Pearly Gates0.0400.0680.0720.060
Blue Star0.0220.0260.0320.027
Среднее:0.0300.0430.047
Таблица 1.

*) Значения представлены в эквиваленте эргометрина, с использованием реагента Ван Урка (см. Vining and Taber, 1959)
**) Номера методов экстракций соответствуют номерам методов данных выше по тексту

Усредненный вес экстрагированных алкалоидов относительно массы семян полученный в методе с использованием нашатырного спирта, метанола и хлороформа дал выход 0.045 , в то время как раствор нашатырного спирта в диэтиловом эфире дал 0.043 а смесь соды и этилацетата - всего 0.030 процентов.

азновидность Pearly Gates показала в тесте наибольшее содержание эрголиновых алкалоидов при использовании всех трех методов экстракции.

Не менее интересен и результат хроматографии для этих трех видов семян:

азновидностьХроматографическая системаАлкалоиды

1234
Heavenly Blue--------chanoclavine

0.470.280.150.23elymoclavine

--------penniclavine

0.670.180.230.28ergometrine

0.760.700.400.52agroclavine

0.620.750.470.26lysergic acid amide
Pearly Gates0.210.120.100.42chanoclavine

0.480.280.180.24elymoclavine

0.440.220.46--penniclavine

--0.180.240.32ergometrine

--0.700.420.54agroclavine

0.620.780.480.30lysergic acid amide
Blue Star--------chanoclavine

0.460.280.210.23elymoclavine

--------penniclavine

0.700.200.240.35ergometrine

--------agroclavine

0.600.770.460.31lysergic acid amide

Tabert et al. (1963) используя похожие техники экстракции и анализа получил среднее содержание алкалоидов для разновидностей Ipomoea rubro-caerulea L., Ipomoea alba L., иIpomoea violacea L., как 0.057, 0.042 и 0.024 соответсвенно. Семена , которые он использовал для своих исследований происходили из Англии. Der Marderosian (1965) и Gunn (1972) вообще считали I. robro-caerulea и I. alba разновидностями I. violacea. Сейчас принято считать , что I. Alba это I. violacea var Pearly Gates.

Крайне слабо были исследованы влияние состава почвы, температуры , режима полива и других факторов на выработку алкалоидов во вьюнках. Интересен тот факт, что содержание варьирует от урожая к урожаю, поэтому требуется сделать несколько проб с разных урожаев для получения усредненного результата.

Chanoclavine не был найден в разновидности Heavenly Blue. В то же время Genest (1966) обнаружил это соединение в незрелых семенах, и лишь следы этого соединения - в зрелых. Он предположил, что в несколько стадий алкалоид можно будет превратить в амид лизергиновой кислоты. Agurell и Ramstad (1962) показали, что с уверенностью можно утверждать о процессе конверсии chanoclavine'а в амид лизергиновой кислоты (видимо, в процессе вызревания семян - прим. перев.)

Использованные статьи:

Agurell S. and Ramstad. 1962. Analysis of clavine alkaloids of Penniselum ergot. Lloydia 25: 67.

Alexander, T. G. and D. Banes. 1961. Analysis of the alkaloid content of ergot. J. Pharm. Sci. 50: 201.

Der Marderosian, A. H. 1965. Nomenclatural history of the morning glory, Ipomoea violacea L. Taxon. 14: 234.

---- 1967. Psychotomimetic indoles of the Convolvulaceae. Amer. J. Pharmacol. 44: 345.

Genest, K. 1966. Changes in ergoline alkaloids in seeds during ontogeny of Ipomoea violacea. J. Pharm. Sci. 55: 1284.

Guna, C. R. 1972. Moonflowers, Ipomoea section Calonyction in temperate North America. Brittonia 24: 150.

Hoffman, A. 1968. Psychotomimetic agents. In Burgar, A., editor; Drugs Affecting the Central Nervous System. Vol. 2. Marcel Dekker, New York., pp. 184-185.

MacDougall, T. 1960. Ipomoea tricolor, a hallucinogenic plant of Zapotecs. Bol. Centr. Invest. Anthropol. (Mexico) 6: 6.

Niwaguchi T, and T. Inoue. 1969. Chromatographic separation of lysergic acid amide in morning glory seeds. J. Chromatog. 43: 510.

Schultes, R. E. 1941. A contribution to our knowledge of Rivea corymbosa, the narcotic ololiuqui of the Aztecs. Botanical Museum of Harvard University, Cambridge, Mass.

Taber, W. A., L. C. Vining, and R. A. Heacock. 1963. Clavine and lysergic acid alkaloids in varietes of morning glory. Phytochem. 2: 65.

Vining, L. C. and W. A. Taber, 1959. Estimation of ergot alkaloids of Claviceps purpurea. Can. J. Microbiol. 5: 441.

Waldi, D. 1962. Spray reagents for thin layer chromatography. In Stahl, E. editor; Thin-layer Chromatography. New York, Academic Press, p. 490.

Comments